logo
  1. Utama
  2. Aneurysm

ELISA - apa itu, menyahkodkan keputusan

ELISA adalah kaedah diagnostik makmal yang moden dalam pelbagai jenis penyakit. Singkatan ini bermaksud enzyme immunoassay. Inti dari teknik ini adalah untuk menentukan titer (aktiviti) antibodi.

Teknik ELISA semakin popular pada hari ini. Ia digunakan dalam perubatan klinikal untuk diagnosis pelbagai patologi, serta dalam kajian eksperimen yang memerlukan penentuan tepat kepekatan berbagai senyawa dalam media yang dipelajari.

Prinsip ELISA

Immunoassay adalah tindak balas imunologi. Ia berdasarkan penambahan antibodi tertentu atau antigen kepada medium ujian (selalunya darah ujian), diikuti oleh penentuan enzim penumpuan kompleks antigen-antibodi yang dihasilkan. Dengan kepekatan kompleksnya, adalah mungkin untuk menilai tahap atau aktiviti kompaun yang ditentukan dalam medium di bawah kajian.

Penentuan kepekatan antigen-antibodi kompleks biasanya dijalankan menggunakan peralatan khas dengan kaedah kromatografi.

Petunjuk untuk

Analisis ELISA dijalankan untuk pelbagai petunjuk, yang utama dalam perubatan klinikal adalah:

  • Diagnosis patologi berjangkit dengan penghantaran seksual yang banyak (STI), yang termasuk klamidia, mycoplasmosis, ureaplasmosis, trichomoniasis, dengan antibodi spesifik kepada ejen berjangkit yang dikesan.
  • Diagnosis penyakit berjangkit peletusan yang berbeza untuk menentukan tahap proses patologi, terutamanya dalam proses mendiagnosis hepatitis virus parenteral dan HIV.
  • Menentukan kepekatan hormon bagi diagnosis pelbagai patologi organ endokrin (kelenjar endokrin).
  • Pengenalpastian pelbagai sebatian untuk mendiagnosis penyebab mabuk organisma dalam hal keracunan, gigitan serangga atau ular.

Dengan tanda-tanda perubatan ini, ujian darah ELISA dilakukan. Juga, teknik ini secara aktif digunakan dalam ubat eksperimen semasa pelbagai kajian klinikal semasa pembangunan ubat baru, vaksin untuk imunoprophylaxis.

Bagaimanakah kajian dilakukan?

ELISA dilakukan di makmal khusus. Sebelum ini, darah vena diambil untuk memegangnya, biasanya dari urna ulnar dalam jumlah 5-10 ml, yang kemudiannya dihantar ke makmal. Secara purata, keputusan analisis boleh diperoleh pada hari berikutnya, yang merupakan titik penting untuk rawatan awal selepas diagnosis penyakit.

Bagaimana untuk mempersiapkan IFA

Untuk mendapatkan keputusan yang boleh dipercayai daripada ujian imunosorben berkaitan enzim, beberapa cadangan persediaan mudah harus diikuti, yang termasuk:

  • Sehari sebelum analisis, anda harus meninggalkan penggunaan makanan berlemak (daging, daging salai) dan alkohol.
  • Bahan untuk penyelidikan mesti diambil pada waktu pagi dengan perut kosong.
  • Pada hari kajian, adalah wajar untuk mengelakkan tekanan fizikal dan psiko-emosi.
  • Sebelum kajian, anda harus cuba untuk tidak merokok.

Pelaksanaan cadangan-cadangan ini adalah perlu untuk mengelakkan mendapat keputusan ELISA yang positif palsu.

Kebanyakan hasil enzim positif imunoassay yang diperoleh adalah disebabkan oleh pelaksanaan cadangan yang tidak wajar. Ini adalah dalam kebanyakan kes yang berkaitan dengan penggunaan makanan berlemak, yang membawa kepada peningkatan dalam kepekatan trigliserida plasma (lemak), yang mengurangkan kekhususan ELISA yang dilakukan.

Keputusan penyahkodan

Ujian darah untuk antibodi menggunakan ELISA mempunyai 2 pengubahsuaian - penentuan kualitatif dan kuantitatif. Dalam penentuan kualitatif antibodi, hasilnya boleh positif (antibodi dikesan, yang menunjukkan kemungkinan adanya proses patologi yang disebabkan oleh agen berjangkit) atau negatif (tiada antibodi, yang menunjukkan ketiadaan proses menular).

Ketiadaan antibodi tidak selalu merupakan penunjuk mutlak ketiadaan proses menular. Hal ini disebabkan oleh fakta bahawa selepas jangkitan, antibodi tidak terbentuk dengan segera, tetapi dalam jangka waktu tertentu (sekurang-kurangnya sekitar 2 minggu). Oleh itu, untuk mengesahkan ketiadaan jangkitan, ELISA boleh diulang selepas beberapa waktu.

Dalam kuantitatif ELISA, titer (aktiviti) antibodi ditentukan, serta kelasnya. Dalam kebanyakan kes, bagi diagnosis penyakit berjangkit, antibodi kelas IgG (imunoglobulins G) dan IgM (imunoglobulin M) dikesan, yang terbentuk di dalam badan pada pelbagai selang selepas jangkitan, oleh itu penyahkulasian hasil analisa boleh mempunyai beberapa makna:

  • Aktiviti IgM yang meningkat dan ketiadaan IgG adalah bukti jangkitan baru-baru ini dan proses akut jangkitan.
  • Peningkatan aktiviti IgM dan IgG - peningkatan proses berjangkit semasa jangkitan kronik dan jangkitan jangka panjang.
  • Aktiviti tinggi IgG dan ketiadaan IgM adalah proses kronik proses menular terhadap latar belakang jangkitan jangka panjang, dan selepas itu lebih daripada enam bulan telah berlalu (masa yang diperlukan untuk pembentukan antibodi kelas IgG).

Secara umum, penyahkodan hasil ELISA untuk setiap proses menular mempunyai ciri-ciri tertentu. Penentuan lebih tepat kehadiran penyakit berjangkit, serta tahap kursus, dilakukan oleh doktor.

ELISA kini merupakan kaedah pilihan untuk mendiagnosis kebanyakan penyakit berjangkit. Berdasarkan hasil kajian sedemikian, doktor mempunyai peluang untuk menubuhkan diagnosis yang tepat dan menentukan tahap proses patologi untuk tujuan rawatan yang mencukupi dan berkesan berikutnya.

Analisis ELISA - apakah itu: kaedah keputusan

Ujian darah digunakan untuk menilai keupayaan badan untuk menentang penyakit berjangkit atau menentukan fasa patologi. Kaedah ELISA menduduki tempat yang penting di kalangan kajian makmal, membantu mengkaji secara menyeluruh aktiviti fungsi perlindungan darah, untuk menentukan kekurangan immunodeficiency dalam penyakit berjangkit, gangguan darah, proses hormon, autoimun.

Apakah enzim immunoassay

Kaedah ini digunakan untuk ujian makmal, menentukan kehadiran faktor perlindungan sifat protein darah (antibodi) kepada agen patogenik tertentu (antigen). Immunoassay menentukan imunoglobulin darah, yang dapat dikesan dalam bentuk imunokompleks. Mereka muncul apabila reaksi neurohumoral kompleks pertahanan imun seseorang berlaku, yang menjadi tindak balas kepada pengenalan antigen asing.

Melawan setiap jenis agen penyakit, antibodi spesifik dihasilkan di dalam badan. Seterusnya, mengikat mikroorganisma atau antigen patologi berlaku, kompleks "antigen-antibodi" terbentuk. Kemudian ia dinetralkan, lisis enzimatik berlaku, tindak balas fagositosis, dan menamatkan proses penyingkiran dari badan. Kehadiran kompleks khusus, ditentukan oleh ELISA, menunjukkan jenis patogen, bahan berbahaya dalam pesakit.

Kelas imunoglobulin

Para saintis telah menemui dan mengkaji 5 jenis imunoglobulin: IgE, IgD, IgG, IgM, IgA. Terdapat kelas-kelas lain, tetapi mereka masih berada di peringkat penyelidikan, dan peranan mereka belum sepenuhnya dijelaskan. Dalam perubatan praktikal adalah penting A, M, G. Informativiti, ketepatan penentuan adalah berdasarkan selang masa yang mereka muncul, mencapai maksimum dan hilang.

  1. Immunoglobulins IgA (A) - melaksanakan fungsi perlindungan membran mukus sistem kencing, saluran gastrointestinal, saluran pernafasan. Tidak mustahil untuk mengenal pasti mereka dalam permulaan patologi yang teruk, mereka terbentuk hanya 2 minggu selepas tanda-tanda pertama penyakit, dalam beberapa keadaan nanti. Globulin A tertumpu pada tisu mukus (kira-kira 80% daripada jumlah keseluruhan). Selebihnya ada dalam darah untuk meneutralkan dan memusnahkan mikroorganisma. Menjelang minggu 8 selepas pengurangan fasa akut patologi, bilangan imunoglobulin ini dikurangkan untuk menyelesaikan kehilangan.
  2. Penanda pertama dan utama perkembangan penyakit akut adalah IgM globulins (M). Analisis mereka menunjukkan pada hari kelima selepas permulaan patologi pertama. ELISA mengesan imunoglobulin ini untuk 6 minggu pertama, maka mereka cepat hilang.
  3. Kelas imunoglobulin IgG (G) menunjukkan tindak balas imun residu dalam darah kepada proses patologi. Analisis akan menunjukkan faktor sebulan selepas permulaan penyakit. Kemudian mereka masih boleh berbulan-bulan, tahun, dan juga seumur hidup yang ditentukan dalam analisis. Mereka melindungi seseorang daripada berulang penyakit, kadang-kadang memastikan kemustahilan perkembangan menengah patologi. Apabila menentukan pertumbuhan imunoglobulin G mengesyaki jangkitan semula patologi. Untuk pengesahan, beberapa ujian ELISA dijalankan dengan selang 2 minggu.
  4. Dalam parasitologi dan alergi, imunoglobulin IgE (E) digunakan.
  5. Immunoglobulin IgD (D) adalah pada B-limfosit, kepekatan kecil ditemui pada orang yang sihat. Mencapai nilai maksimum selepas 10 tahun kehidupan manusia. Dalam analisis ELISA, pertumbuhan imunoglobulin D dicatatkan pada pesakit dengan patologi sistemik tisu penghubung, semasa kehamilan, dengan asma bronkial, penyakit yang dipicu oleh keadaan imunodefisiensi.

Petunjuk untuk ujian darah oleh ELISA

Menggunakan analisis ini, anda boleh menilai keberkesanan rawatan, menjalankan kajian komprehensif sebelum operasi pemindahan, menentukan keadaan immunodeficiency dan antibodi kepada lebih daripada 600 jenis alergen. ELISA menggunakan ujian darah sebagai kaedah tambahan untuk mengesan sel-sel kanser. Berikan analisis jika perlu, pengesanan antibodi kepada mikrob yang menimbulkan patologi kelamin:

  • trikomoniasis;
  • sifilis;
  • toksoplasmosis;
  • mycoplasmosis;
  • ureaplasmosis

Dengan pencerobohan helminthic, peningkatan bilangan imunoglobulin akan dicatatkan dalam ujian ELISA. Kajian dijalankan untuk mengesahkan bahawa pesakit mempunyai:

  • Epstein-Barr virus;
  • jangkitan herpes;
  • cytomegalovirus;
  • kumpulan hepatitis virus.

Dalam parasitologi

ELISA digunakan dalam diagnosis patologi parasit, imunoglobulin tertentu IgE menjadi penunjuk. Pertumbuhan darah dicatatkan apabila tubuh pesakit dijangkiti parasit. Immunoglobulin E menjadi penanda reaksi atopik dalam proses alergi. Kandungan dalam darah - tidak penting. Ia adalah setempat, sebagai peraturan, pada membran mukosa, makrofag, basofil.

Fungsi utama kompleks protein ialah perlindungan membran mukus badan. Beliau turut mengambil bahagian dalam reaksi imun yang bertujuan untuk memusnahkan parasit. Bertanggungjawab untuk pengaktifan makrofag IgE dan eosinofil. Apabila dibandingkan dengan data analisis, fakta ini membantu menubuhkan diagnosis. ELISA digunakan untuk mengesan:

  • opisthorchiasis akut kronik;
  • cacing pusingan: pinworms, ascaris;
  • Giardia;
  • trichinosis;
  • amebiasis;
  • bentuk leishmaniasis;
  • kandungan toksoplasma.

Ujian darah oleh ELISA

Ujian darah ELISA bukan satu-satunya pilihan untuk menentukan immunoglobulin. Kadang-kadang untuk kajian ini, cecair spinal, tisu vitreous, cecair amniotik dikumpulkan. Apabila menggunakan darah, ia dikumpulkan dari vena cubital dengan jarum suntikan. Ia perlu mengambil analisis perut kosong, sebelum ELISA tidak disyorkan untuk mengambil ubat-ubatan yang boleh menjejaskan hasilnya. Ia perlu menolak alkohol, merokok, penggunaan bahan narkotik sebelum penghantaran biomaterial. Varian keputusan ujian:

  1. Dengan immunoglobulin negatif IgG, IgM, IgA, doktor mengatakan tiada patologi atau peringkat awal. Hasil yang sama (negatif) akan selepas pemulihan penuh selepas tempoh yang panjang.
  2. Jika IgG adalah positif, dan IgM dan IgA tidak dikesan, ini menunjukkan pembentukan imuniti selepas vaksinasi atau penyakit berjangkit.
  3. Di IgM yang tinggi dan titisan IgA yang negatif, IgG didiagnosis sebagai penyakit berjangkit akut.
  4. Dengan penunjuk positif IgG, IgM, IgA, doktor bercakap tentang fasa akut mengenai penyakit kronik yang sedia ada.
  5. Dalam jangkitan kronik, yang berada di peringkat penenggelaman (remisi), analisis ELISA menunjukkan titit negatif IgM, dan IgA dan IgG akan positif.

Kelebihan dan keburukan analisis ELISA

Titik negatif utama kajian ini adalah kemungkinan hasil positif palsu atau palsu. Alasan untuk tidak dapat dipercayai adalah mengambil ubat, kelemahan teknikal makmal. Untuk memalsukan analisis dapat proses gangguan metabolik dalam tubuh. Kelebihan utama ELISA adalah:

  • ketepatan, kekhususan diagnostik;
  • analisis kos rendah;
  • kelajuan mendapatkan hasil;
  • kemungkinan kawalan dinamik tahap patologi, keberkesanan rawatan;
  • kesederhanaan penyelidikan;
  • keupayaan untuk menjalankan penyaringan jisim penyakit berjangkit;
  • tanpa rasa sakit, keselamatan untuk pesakit;
  • permohonan dalam pemprosesan teknologi maklumat.

Apakah ujian darah ELISA dan mengapa ia penting untuk diagnosis

Ujian darah ELISA, apa itu? Mungkin semua orang mengingat bahawa sebagai tindak balas terhadap penembusan virus untuk memerangi mereka, tubuh mula menghasilkan kompleks antibodi. Sebatian imunologi ini mempunyai keupayaan untuk mengenali dan memusnahkan "patogen" mereka. Mengenai ini dan membina satu kajian yang membolehkan anda menentukan kehadiran dan jumlah immunofermentov, ciri penyakit tertentu.

Beberapa maklumat umum tentang analisis

ELISA, atau ELISA, memungkinkan untuk menentukan antibodi tertentu (imunoglobulin) kepada sejenis patogen tertentu. Kaedah ELISA adalah berdasarkan kepada yang berikut:

  • sebagai tindak balas kepada pengenalan mikroorganisma, sistem imun mula menghasilkan antibodi;
  • imunokompleks adalah khusus dan merosakkan sel asing sahaja;
  • apabila patogen ditambahkan ke serum ekstrak pesakit, jika terdapat antibodi, sebatian standard terbentuk: antibodi antigen, dan pembebasan enzim aktif.

Ujian positif atau negatif dalam makmal diadili oleh sama ada tindak balas berlaku dalam plasma selepas penambahan patogen, dan bagaimana prosesnya sengit.

Norma untuk orang yang sihat adalah imunokompleks tunggal atau ketiadaan mereka.

Analisis ELISA tidak menunjukkan sebarang penyakit tertentu, ia hanya dapat menganggap kira-kira jenis patogen yang menyebabkan kemunculan kompleks imun dan menentukan tahap proses keradangan. Ini membolehkan anda menyesuaikan kaedah diagnostik lanjut.

Mengenai imunoglobulin

Apakah imunoglobulin yang jelas kepada banyak: kompleks imun yang terbentuk sebagai tindak balas terhadap kemasukan sel-sel asing. Tetapi apakah mereka?

Kaedah ELISA membolehkan anda memilih 5 jenis imunoglobulin:

A, M dan G dianggap penting untuk diagnostik (beberapa sumber menunjukkan hanya tiga kompleks imun untuk diagnostik), jadi patut dipertimbangkan ciri-ciri mereka:

  • A - bertanggungjawab untuk perlindungan membran mukus. Dalam patologi akut, ia muncul dalam darah 14 hari selepas jangkitan, dan kadang-kadang kemudian, dan hilang selepas 8 minggu dari permulaan simptom penyakit. Sekiranya IgA immunocomplex bertahan lebih lama, maka kita boleh menganggap peralihan penyakit itu kepada bentuk kronik. Antivirus A menunjukkan kerosakan pada membran mukus pundi kencing, usus atau organ pernafasan.
  • M - berfungsi sebagai penunjuk fasa akut penyakit. Ia dinyatakan dalam plasma selepas 5 hari dari masa jangkitan (walaupun tidak ada tanda-tanda penyakit tersebut) dan akan hilang selepas 6 minggu jika resolusi proses akut berlaku.
  • Reaksi residu dan imunokompleks berterusan untuk masa yang lama (kadang-kadang sepanjang hayat) dan mencegah jangkitan semula atau berlakunya tindak balas. Prinsip vaksinasi adalah berdasarkan pembentukan antibodi G, ketika imunitas yang tahan lama dikembangkan pada manusia setelah pengenalan mikroba dan virus yang dilemahkan. Peningkatan G adalah penunjuk bahawa patogen telah memasuki semula badan atau memburukkan lagi jangkitan kronik.

Ujian darah ELISA untuk E dan D tidak termasuk dalam program pemeriksaan mandatori. Dia dilantik dalam kes berikut:

  • E - apabila diandaikan bahawa patologi itu disebabkan oleh parasit;
  • D - jika terdapat kebarangkalian bahawa patologi bersifat sistemik atau telah timbul akibat kekurangan imunodefisiensi.

Ujian darah ELISA memungkinkan untuk mengesan antibodi spesifik kepada ejen-ejen asing yang sudah ada pada peringkat awal patologi. Ujian ini berdasarkan reaksi antigen-antibodi standard, yang membolehkan untuk menentukan kehadiran antibodi kepada agen penyebab.

Petunjuk untuk diagnosis makmal

Ujian imunosorben berkaitan enzim ditunjukkan untuk ujian darah jika patologi berikut disyaki:

  • onkologi;
  • hepatitis virus (untuk semua jenis virus);
  • lesi herpetic pada mukosa atau kulit;
  • beberapa proses menular (salmonellosis, campak, ensefalitis, disentri);
    sifilis;
  • jangkitan seksual (gonorrhea, chlamydia, mycoplasmosis, dll);
  • proses atopik (alergi);
  • cytomegalovirus;
  • gangguan endokrin;
  • immunodeficiency;
  • kemandulan;
  • pencerobohan helminthic.

Ujian darah ELISA juga membolehkan anda meramal perjalanan beberapa penyakit tidak berjangkit:

  • serangan jantung;
  • strok;
  • gangguan neurologi;
  • patologi buah pinggang.

Juga dengan tujuan pencegahan membelanjakan IFA semasa peperiksaan perubatan.

Diagnostik ELISA dapat mengesan lebih daripada 600 antibodi untuk antigen berjangkit dan tidak berjangkit, yang menjadikan kajian ini sangat diperlukan untuk mengesan penyakit pada peringkat awal. ELISA dianggap paling bermaklumat ketika diuji untuk HIV dan onkologi.

Apakah asas teknik ini

Nampaknya terdapat hanya lima imunoglobulin, dan dengan bantuan mereka sejumlah besar proses patologis ditentukan. Adakah mungkin?

Mungkin. Ini kerana pengiraan sebatian imunoglobulin dilakukan mengikut ujian yang berlainan:

  • badan antinuklear (menunjukkan proses autoimun);
  • faktor rheumatoid (mendedahkan lesi reumatik);
  • DNA double-stranded (dikesan kumpulan protein yang muncul dalam penyakit sistemik);
  • Skrin ENA (mentakrifkan beberapa jenis antigen, ciri faktor reumatik atau luka tisu sistemik penyambung sistemik);
  • Antibodi anticardiolipin (imunokompleks dibentuk semasa HIV, epilepsi, dan beberapa proses sistemik);
  • Skrin ANGA (sebatian ciri proses autoimun);
  • citruline peptide (antibodi muncul dalam rheumatoid arthritis);
  • Protein C-reaktif (protein C-reaktif menunjukkan kehadiran akut atau keterpaksaan proses kronik);
  • analisis immunofluorescence (akan menunjukkan kegagalan hormon atau kehadiran tumor malignan).

Analisis penyahkodan dilakukan dengan mengambil kira kaedah yang digunakan. Penilaian data yang diperoleh agak rumit dan dilakukan oleh seorang doktor, dan untuk pesakit yang ingin menganalisis data yang diperoleh dari laboratorium secara mandiri sebelum mengunjungi dokter, jadual berikut dapat ditawarkan:

Jadual menunjukkan hanya maklumat umum. Analisis ELISA dalam menguraikan oleh doktor mengambil kira bukan sahaja kehadiran sebatian imun-enzim, tetapi juga bilangan mereka, serta kaedah yang digunakan untuk menjalankan kajian.

Kelebihan kaedah

Penganalisis ELISA sering digunakan dalam diagnosis pembezaan penyakit dan untuk memantau kualiti rawatan. Teknik ini mempunyai beberapa kelebihan:

  • Kekurangan Kit diagnostik adalah agak murah.
  • Kesederhanaan Tidak ada keperluan untuk melengkapi peralatan canggih, dan penyelidikan boleh dijalankan di makmal mana pun.
  • Sangat bermaklumat. Kebolehpercayaan menentukan jenis antigen adalah kira-kira 90%.
  • Kelajuan. Penganalisis ELISA adalah automatik, dalam makmal kecemasan, kajian-kajian ini boleh diperolehi dalam masa beberapa jam selepas bahan biologi telah diserahkan.
  • Diagnosis awal. Immunoglobulin muncul dalam darah pada peringkat awal penyakit ini.
  • Tempoh penyimpanan. Bahan yang diambil dari pesakit boleh disimpan sehingga satu tahun.
  • Peringkat penyakit ini. Nisbah dan ciri-ciri utama imunoglobulin yang terdapat dalam plasma memungkinkan untuk menentukan keterukan kursus dan peringkat penyakit.
  • Kawalan dinamik. Semasa rawatan dengan ELISA, ELISA membenarkan pembetulan terapi dilakukan bergantung kepada parameter makmal.
  • Kemudahan biomelan pensampelan. Sebilangan kecil darah vena cukup untuk diagnosis.

Ujian darah ELISA sangat bermaklumat dan membolehkan anda mengenal pasti patologi pada peringkat awal perkembangan, tetapi hanya berdasarkan penyelidikan makmal, tiada diagnosis dibuat. Diagnosis akhir mungkin hanya selepas pemeriksaan penuh pesakit.

Kelemahan teknik ini

Walaupun terdapat beberapa kelebihan, imunofermentasi ujian darah mempunyai beberapa kelemahan:

  • ketidakupayaan untuk menentukan jenis patogen dengan ketepatan 100% (untuk beberapa penyakit imunoglobulin yang serupa dihasilkan);
  • kebarangkalian mendapatkan hasil positif yang salah (ia berlaku pada wanita hamil atau jika peraturan-peraturan untuk membuat analisa tidak diikuti).

Berikut mungkin menjejaskan ketepatan diagnosis:

  • merokok dan minum;
  • ketegangan saraf atau tekanan;
  • aktiviti fizikal;
  • mengambil ubat tertentu (darah boleh disumbangkan hanya 10 hari selepas pemberhentian ubat).

Kekurangan ujian darah untuk ELISA tidak menghalang doktor mengenali kaedah itu sebagai kaedah yang paling mudah dan bermaklumat untuk mengesan penyakit pada peringkat awal. Jika perlu, untuk menjelaskan data yang diperoleh dari makmal, pesakit boleh diberikan ujian yang lebih spesifik, yang membolehkan mereka lebih tepat menentukan jenis patogen.

ELISA dalam parasitologi


IgE adalah pelik kepada pencerobohan helminthic, tetapi boleh muncul dalam plasma dan sekiranya beberapa alahan (ia didapati dalam darah dalam jumlah kecil). Walaupun kemungkinan tindak balas positif palsu, darah untuk ELISA sering ditetapkan oleh ahli parasit untuk mengesan jenis parasit berikut:

  • helminths;
  • Toxoplasma;
  • amuba;
  • trichinella;
  • Giardia;
  • yang paling mudah;
  • cacing rata.

Pencerobohan cacing, serta patogen berjangkit, menyebabkan pengeluaran antibodi E. Pertumbuhan darah penanda ini hampir selalu menunjukkan kehadiran parasit dalam badan (dengan tindak balas atopik, ia tetap pada tahap yang sama atau naik sedikit).

Parasit tidak semestinya terletak pada mukosa usus, mereka boleh menembusi tisu buah pinggang, jantung dan organ lain. Sekiranya parasit di dalam usus mudah dikesan oleh kehadirannya di dalam feses ujian telur, larva atau orang dewasa, kerosakan kepada tisu-tisu lain ditentukan hanya oleh immunoassay enzim.

Sekarang ramai telah menjadi jelas apa yang ELISA itu dan tidak lagi menakutkan pengurangan makmal misteri. Sesungguhnya kajian ini bukan sahaja dapat mengesahkan penyakit ini. Sesetengah immunoassay enzim (sifilis, HIV) adalah sebahagian daripada program peperiksaan perubatan wajib, dan hasil negatif adalah penunjuk kesihatan. Dan jika ujian ternyata positif, maka ini bukan sebab panik: semakin lama rawatan penyakit yang terdeteksi bermula, prognosis lebih baik.

ELISA (ELISA, ELISA). Intipati, prinsip kaedah dan peringkat kajian. Analisis antibodi, kelas antibodi, kompleks imun.

Laman ini menyediakan maklumat latar belakang. Diagnosis dan rawatan yang mencukupi penyakit ini mungkin dilakukan di bawah penyeliaan seorang doktor yang teliti. Mana-mana ubat-ubatan mempunyai kontraindikasi. Perundingan diperlukan

Berhubung dengan perkembangan teknologi selular, biologi molekul, genetik, fizik, kimia dan beberapa disiplin berteknologi tinggi lain, kaedah berketepatan tinggi dan berteknologi tinggi baru diperkenalkan ke dalam amalan harian. Kecenderungan interdisipliner ini mempengaruhi kedua bidang pengetahuan perubatan dan bidang berkaitan masalah biologi dan biokimia. Sepanjang sepuluh tahun yang lalu, kaedah diagnostik makmal klinikal yang disebut enzyme immunoassay telah menjadi meluas dan diperkenalkan kepada amalan massa.

Secara umum, teknologi reaksi enzimatik dan radiologi imunologi telah digunakan secara meluas dalam menaip sel, kultur sel, dan pelbagai tisu sejak awal 80an abad ke-20. Walau bagaimanapun, kaedah ini sangat susah, tidak bersatu, tidak bersandar, yang mengecualikan penggunaannya untuk tujuan terapeutik dan diagnostik secara besar-besaran. Kaedah sedemikian hanya digunakan oleh makmal sempit, pengetahuan yang intensif dan sangat khusus.

Walau bagaimanapun, dengan perkembangan teknologi, mikropeknologi, pengeluaran pelbagai bahan biopolimer, ia menjadi mustahil untuk menghasilkan set diagnostik imunfera siap sedia yang boleh digunakan oleh makmal-makmal perubatan dan institusi pencegahan profil yang luas. ELISA digunakan secara meluas untuk mendiagnosis pelbagai jangkitan (klamidia, sifilis, sitomegalovirus, toxoplasmosis, herpes, dan lain-lain), kedua-dua akut dan kronik, serta bentuk tersembunyi yang berlaku tanpa gejala klinikal. penyakit. Mari cuba untuk mencari tahu apa kaedahnya, dan prinsip-prinsip apa yang mendasarinya?

Komponen ELISA - tindak balas imun dan reaksi enzim

Reaksi imun, apa itu? Apakah antibodi, antigen?

Apakah tindak balas imun? Apakah antigen?
Pertama sekali, mari kita lihat apa reaksi imun. Reaksi imun adalah tindak balas antigen-antibodi spesifik untuk membentuk kompleks imun. Apa maksudnya? Di permukaan setiap sel mana-mana organisma, ada struktur khas yang disebut antigen. Antigen secara umumnya adalah molekul yang membawa maklumat tentang sel (seperti maklumat pada lencana dalam seseorang, di mana data asas orang itu ditunjukkan).

Antigen individu dan spesies - apa itu? Mengapa kita memerlukan antigen ini?

Terdapat antigen individu, iaitu, hanya terdapat dalam organisma tertentu ini. Antigen individu ini berbeza dalam semua orang, ada yang sama antara satu sama lain, tetapi masih berbeza. Dua salinan antigen individu yang sama tidak wujud dalam alam semulajadi!

Jenis antigen utama kedua adalah antigen spesies, iaitu, yang wujud dalam spesies makhluk hidup tertentu. Sebagai contoh, seseorang mempunyai antigen spesiesnya sendiri, yang biasa berlaku kepada semua orang, tikus mempunyai antigen spesies tikus mereka sendiri, dan sebagainya. Antigen spesies dan individu semestinya ada pada permukaan setiap sel.

Antigen spesies digunakan oleh sel-sel sistem imun untuk mengenal pasti "musuh - musuh".

Bagaimanakah pengiktirafan antigen berlaku?

Sel imun mengikat sel yang mencurigakan dan mengendalikan identifikasi antigen individu. Dalam ingatan sel "direkodkan" imun kelihatan seperti "antigen anda." Oleh itu, jika antigen sel yang mencurigakan bertepatan dengan perihalan "antigen sendiri", ini bermakna bahawa sel ini tidak menimbulkan bahaya sendiri. Kemudian sel kekebalan "menghilangkan" dan daun. Dan jika antigen tidak bertepatan dengan perihalan "sendiri", maka sel kekebalan mengenal pasti sel ini sebagai "alien", dan oleh itu berpotensi berbahaya bagi seluruh organisma. Dalam kes ini, sel kekebalan tidak "dilonggarkan", tetapi mula memusnahkan objek berbahaya. Ketepatan pengiktirafan imunologi sedemikian menakjubkan - 99.97%. Terdapat hampir tiada kesilapan!

Apakah antibodi, kompleks imun?
Apakah antibodi?

Antibodi adalah molekul khas yang terletak di permukaan sel imun. Ia adalah antibodi yang mengikat antigen sel suspek. Selanjutnya, antibodi menghantar maklumat ke dalam sel, di mana pengiktirafan berlaku, dan menerima isyarat terbalik dua jenis "orang sendiri" atau "orang lain". Apabila isyarat "antibodi" anda memusnahkan sambungan dengan antigen dan mengeluarkan sel.

Apakah kompleks imun?
Apabila keadaan isyarat "alien" terbentang berbeza. Antibodi tidak memecahkan koneksi dengan antigen, tetapi sebaliknya, menghantar isyarat khusus, menyebabkan "tetulang". Secara biologi, ini bermakna bahawa antibodi lain yang berada di bahagian lain sel mula bergerak ke tapak di mana isyarat bahaya berasal, dan juga membentuk hubungan antara mereka dan antigen yang ditangkap. Pada akhirnya, antigen ternyata dikelilingi oleh semua pihak dan dilekatkan dengan tegas. Antibodi antigen + kompleks ini dipanggil kompleks imun. Dari saat ini, penggunaan antigen bermula. Tetapi sekarang butiran proses meneutralkan antigen tidak menarik minat kita.

Jenis-jenis antibodi (IgA, IgM, IgG, IgD, IgE)
Antibodi adalah struktur protein, yang masing-masing mempunyai nama kimia, yang digunakan sebagai sinonim untuk perkataan antibodi. Jadi, antibodi = imunoglobulin.

Terdapat 5 jenis imunoglobulin (Ig) yang dikaitkan dengan pelbagai jenis antigen di bahagian tubuh manusia yang berlainan (contohnya, pada kulit, pada membran mukus, dalam darah, dan lain-lain). Iaitu, antibodi mempunyai pembahagian tenaga kerja. Imunoglobulin ini dipanggil huruf Latin - A, M, G, D, E dan ditunjukkan seperti berikut - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

Dalam diagnosis, hanya satu jenis antibodi yang digunakan, yang paling khusus untuk mikrob dikesan. Iaitu, pengikatan antibodi jenis ini kepada antigen yang dapat dikesan selalu berlaku. IgG dan IgM yang paling biasa digunakan.

Prinsip tindak balas imun ini (ketepatan unik dan spesifikasi pengiktirafan objek biologi yang ditentukan) yang mendasari immunoassay enzim. Oleh kerana ketepatan antibodi yang tinggi dalam pengiktirafan antigen, ketepatan keseluruhan kaedah immunoassay enzim juga adalah yang tertinggi.

Reaksi enzim

Apakah reaksi enzimatik? Apakah afiniti, substrat dan produk reaksi?
Marilah kita teruskan pertimbangan reaksi enzimatik dalam kerja kaedah immunoassay enzim.

Apakah reaksi enzimatik?

Reaksi enzimatik adalah tindak balas kimia di mana satu bahan ditukar kepada yang lain dengan tindakan enzim. Bahan di mana tindakan enzim dipanggil substrat. Bahan yang diperoleh hasil pendedahan kepada enzim dipanggil produk reaksi. Selain itu, keunikan reaksi enzimatik adalah bahawa enzim tertentu bertindak hanya pada substrat tertentu. Properti enzim ini untuk mengiktiraf "substrat "nya disebut afinitas.

Oleh itu, setiap enzim hanya menjalankan satu tindak balas khusus untuknya. Enzim di dunia biologi diketahui ramai, serta reaksi enzim. Dalam enzim immunoassay, hanya beberapa reaksi enzim yang digunakan - tidak lebih daripada 10. Pada masa yang sama, tindak balas enzim seperti itu dipilih, produknya adalah bahan berwarna. Kenapa produk reaksi enzimatik harus diwarnakan? Kerana untuk mengira kepekatan bahan daripada penyelesaian berwarna, terdapat kaedah kimia mudah - colorimetry.

Kaedah colorimetry - intipati dan prinsip

Colorimetry menggunakan ukuran ketumpatan warna penyelesaian, dan kepekatan bahan dikira dari ketumpatan warna. Pada masa yang sama, satu instrumen khas, colorimeter, mengukur kepadatan warna larutan. Dalam colorimetry, dua pilihan adalah mungkin bergantung kepada ketumpatan pewarna pada kepekatan bahan - ini adalah ketergantungan secara langsung proporsional atau pergantungan songsang berkadar. Dengan hubungan yang berkadar secara langsung, semakin tinggi kepekatan bahan, semakin kuat kepadatan warna larutan. Apabila berkadar songsang, semakin tinggi kepekatan bahan, semakin rendah kepadatan warna larutan. Secara teknikal, ini berlaku seperti berikut: beberapa penyelesaian diambil dengan kepekatan bahan yang diketahui, ketumpatan penyelesaian ini diukur, dan graf kepekatan berbanding ketumpatan warna digambarkan (graf penentukuran).

Seterusnya, ketumpatan warna penyelesaian diukur, kepekatan yang ditentukan, dan graf konsentrasi ditemui mengikut graf penentukuran yang sepadan dengan tahap ketumpatan warna penyelesaian yang diukur. Dalam colorimeters automatik moden, mereka menentukur sekali sahaja, maka peranti itu sendiri membina lengkung penentukuran yang kekal dalam ingatan dan langkah instrumen berlaku secara automatik.

Dalam ELISA, enzim berikut paling sering digunakan: peroksidase, alkali fosfatase, avidin.

Bagaimana reaksi imunologi dan enzim yang digabungkan dalam ELISA? Kami kini beralih kepada pertimbangan enzyme immunoassay. Tahap apa yang disertakan dan apa yang berlaku apabila reaksi-reaksi ini berlaku? Immunoassay adalah langsung dan tidak langsung.

Enzim immunoassay langsung - peringkat dari

Dalam immunoassay enzim langsung, antibodi kepada antigen yang dapat dikesan digunakan, yang dikaitkan dengan label tertentu. Label khusus ini adalah substrat reaksi enzim.

Melampirkan antigen ke permukaan telaga dan menggabungkan antigen dengan antibodi

Bagaimanakah immunoassay langsung? Bahan biologi diambil (darah, skrap mukosa, smear) dan diletakkan di dalam sumur khas. Bahan biologi ditinggalkan di dalam telaga selama 15-30 minit supaya antigen dapat melekat pada permukaan telaga. Antibodi kepada antigen yang dikesan kemudiannya ditambah kepada telaga-telaga ini. Ini bermakna dengan mengesan antigen, seperti sifilis, antibodi ditambah terhadap antigen sifilis. Antibodi ini diperoleh secara industri, dan makmal membeli kit siap pakai. Campuran bahan ujian dan antibodi ini tersisa untuk beberapa waktu (dari 30 minit hingga 4-5 jam) supaya antibodi dapat mencari dan menghubungi antigen "sendiri" mereka. Sampel antigen, lebih banyak antibodi akan mengikatnya.

Pembuangan antibodi "tambahan"

Seperti yang disebutkan, antibodi juga dikaitkan dengan label tertentu. Oleh kerana antibodi ditambah secara berlebihan, tidak semua mereka akan mengikat antigen, dan jika tidak terdapat antigen dalam sampel, maka, tidak ada antibodi yang akan mengikat antigen yang dikehendaki. Untuk mengeluarkan antibodi "tambahan", kandungan telaga hanya dituangkan. Hasilnya, semua antibodi "tambahan" dikeluarkan, dan mereka yang dikaitkan dengan antigen kekal, kerana antigen "terpaku" ke permukaan telaga. Telaga tersebut dibilas beberapa kali dengan penyelesaian khusus yang membolehkan anda membasuh semua antibodi "tambahan".

Reaksi enzimatik - pembentukan sebatian berwarna

Kemudian tahap kedua bermula - reaksi enzimatik. Penyelesaian enzim ditambah ke telaga yang dibasuh dan dibiarkan untuk 30-60 minit. Enzim ini mempunyai pertalian untuk substansi (label khusus) yang mana antibodi tersebut dikaitkan. Enzim ini melakukan tindak balas, hasilnya label (substrat) tertentu ini diubah menjadi bahan berwarna (produk). Kemudian kaedah colorimetric mencari kepekatan bahan berwarna ini. Oleh kerana label khusus ini dikaitkan dengan antibodi, ini bermakna kepekatan produk tindak balas berwarna sama dengan kepekatan antibodi. Dan kepekatan antibodi adalah sama dengan kepekatan antigen. Oleh itu, sebagai hasil analisis, kita mendapat jawapan, apakah kepekatan mikroba atau hormon yang dapat dikesan.

Inilah cara imunoassay langsung dilakukan. Walau bagaimanapun, enzim immunoassay hari ini lebih kerap digunakan, kerana kepekaan dan ketepatan immunoassay tidak langsung lebih tinggi daripada yang langsung. Oleh itu, kita teruskan ke immunoassay enzim tidak langsung.

Enzim immunoassay tidak langsung - peringkat

Dalam immunoassay enzim tidak langsung, dua peringkat. Semasa peringkat pertama, antibodi yang tidak dilabelkan untuk antigen yang dapat dikesan digunakan, dan pada peringkat kedua, antibodi berlabel digunakan untuk antibodi pertama yang tidak dilabel. Iaitu, bukannya mengikat antibodi langsung kepada antigen, tetapi kawalan ganda: pengikatan antibodi kepada antigen, selepas itu pengikatan antibodi kedua ke kompleks antibodi + antigen. Sebagai peraturan, antibodi untuk tahap pertama adalah tetikus, dan untuk kambing kedua.

Penetapan antigen pada permukaan telaga dan mengikat antigen dengan antibodi tak berlabel
Sama seperti imunoassay langsung, bahan biologi dikumpulkan - darah, sekam, swab. Bahan biologi yang dikaji dimasukkan ke dalam telaga dan dibiarkan selama 15-30 minit untuk melekatkan antigen ke permukaan telaga. Kemudian, antibodi yang tidak dilabelkan kepada antigen diperkenalkan ke telaga dan dibiarkan untuk tempoh masa (1-5 jam), supaya antibodi akan mengikat antigen "mereka" dan membentuk kompleks imun (peringkat pertama). Kemudian keluarkan antibodi "tambahan", tidak terikat, dengan menuangkan kandungan telaga. Menghasilkan basuh dengan penyelesaian khas untuk penyingkiran lengkap semua antibodi yang tidak terkawal.

Mengikat antibodi berlabel kepada antigen + kompleks antibodi tak berlabel
Kemudian ambil antibodi kedua - dilabel, tambah ke telaga dan sekali lagi pergi untuk beberapa lama - 15-30 minit (peringkat kedua). Pada masa ini, antibodi berlabel mengikat kepada yang pertama - tidak dilabelkan dan membentuk antibodi + antibodi + antigen kompleks. Walau bagaimanapun, kedua-dua antibodi berlabel dan tidak dilabel dimasukkan ke telaga yang berlebihan. Oleh itu, adalah perlu sekali lagi untuk membuang antibodi "ekstra" yang telah dilabelkan yang tidak dikaitkan dengan antibodi tidak berlabel. Untuk melakukan ini, ulangi prosedur menuang kandungan telaga dan mencuci dengan penyelesaian khusus.

Reaksi enzimatik - pembentukan sebatian berwarna
Kemudian buat enzim yang menjalankan reaksi transformasi "label" dalam bahan yang berwarna. Warna berkembang dalam masa 5-30 minit. Kemudian colorimetry dilakukan dan kepekatan bahan berwarna dikira. Oleh kerana kepekatan bahan berwarna sama dengan kepekatan antibodi berlabel, dan kepekatan berlabel sama dengan kepekatan antibodi yang tidak berlabel, yang pada gilirannya sama dengan kepekatan antigen. Oleh itu, kita memperoleh kepekatan antigen yang dapat dikesan.
Kawalan ganda dalam bentuk penggunaan dua jenis antibodi telah meningkatkan sensitiviti dan kekhususan kaedah immunoassay enzim. Walaupun memanjangkan masa analisis dan dimasukkannya langkah-langkah tambahan, kerugian ini dikompensasikan dengan ketepatan hasilnya. Itulah sebabnya pada masa ini sebahagian besar kaedah untuk ELISA adalah immunoassay enzim tidak langsung.


Apakah penyakit yang dikesan oleh immunoassay enzim?

Mari kita anggap mana penyakit dan bahan biologi aktif dikesan oleh immunoassay enzim. Bahan-bahan yang dikesan oleh immunoassay enzim dibentangkan dalam jadual.

Analisis ELISA - apakah itu, menguraikan immunoassay enzim untuk parasit, sifilis, HIV, tuberkulosis. Norm dalam jadual, hasilnya

Terima kasih kepada perkembangan perubatan moden, doktor tidak lagi perlu memberi tumpuan kepada manifestasi penyakit tidak langsung atau untuk menjalankan ujian makmal berbilang peringkat apabila membuat diagnosis. Ia cukup untuk menjalankan satu analisis yang akan mengesahkan atau menafikan diagnosis awal yang didakwa.

Kaedah ini adalah ujian imunosorben berkaitan enzim (ELISA) - kajian ini membolehkan anda untuk mengesan antibodi spesifik dan ciri antigen dari pelbagai patologi, yang mempercepatkan diagnosis.

Apa itu ELISA

Analisis ELISA adalah kajian makmal (kaedah) yang membantu menentukan kehadiran atau ketiadaan antibodi tertentu dalam tubuh untuk melawan virus dan kuantiti mereka.

Asas kajian ini adalah reaksi semulajadi antigen (objek berbahaya kepada tubuh) - antibodi (protein yang memusnahkan objek yang berbahaya), yang membolehkan untuk mengesan kehadiran pelbagai virus dan bakteria.

ELISA adalah tindak balas imun yang semulajadi badan - interaksi antibodi dengan antigen yang sesuai. Oleh itu, semasa ELISA, antigen atau antibodi ditambah secara bergantian ke tiub dengan bahan, selepas itu kepekatan antigen-antibodi kompleks dikesan.

Jika pertandingan terbentuk, kompleks imun timbul, maka tindak balas enzimatik bahan pewarna dengan molekul gabungan berlaku. Ia disebabkan oleh perubahan warna semasa penunjuk enzimatik bahawa penyakit itu dikenal pasti selepas memeriksa tahap kompaun yang ditentukan.

Jenis imunoglobulin

Imunoglobulin manusia dibezakan ke dalam beberapa kelas yang berbeza antara satu sama lain dalam ciri-ciri mereka, struktur, dan ciri-ciri antigenik rantai berat (rantai H). Dalam semua mamalia, termasuk manusia, terdapat lima rantai H, yang menentukan imunoglobulin kepunyaan kelas yang sama: G, M, A, D, E.

Setiap kelas berbeza antara satu sama lain dalam sifat biologi, dan keupayaan untuk mengikat antigen, dan kelajuan dan kekuatan ikatan dengan molekul.

Fungsi setiap immunoglobulin (lg) adalah berbeza:

perlu bagi tindak balas imun

mampu mengikat 5 molekul antigen,

diperlukan untuk pembentukan imuniti awal

Pendidikan imuniti tempatan

Kemunculan imunoglobulin berlaku dalam sejenis "rantai" - lgM lgG, ini adalah bagaimana tubuh bertindak balas terhadap rupa antigen dalam tubuh. Semasa diagnostik makmal, kepekatan tiga immunoglobulin utama - G, M, A. dinilai.

Petunjuk untuk penghantaran analisis untuk imunoglobulin

Analisis IFA menjadi semakin popular setiap tahun.

Kajian sedemikian mempercepatkan diagnosis, dan ini sangat penting untuk merawat penyakit seperti:

  • hepatitis virus;
  • Jangkitan HIV;
  • cytomegalovirus,
  • Epstein-Barr virus,
  • virus herpes,
  • campak
  • rubella
  • batuk kering,
  • salmonellosis
  • disentri,
  • encephalitis yang dilekatkan pada tikus,
  • Bakteria Helicobacter,
  • borreliosis,
  • tetanus
  • sifilis
  • difteri,
  • leptospirosis,
  • klamidia
  • ureaplasmosis,
  • mycoplasmosis
  • batuk kokol.

Analisis yang sama membolehkan menentukan jangkitan dengan parasit:

  • flatworms
  • ascaris
  • amoebas gistolik
  • tremada hepatik,
  • Giardia
  • Toxoplasma,
  • trik,
  • kebetulan
  • cestod.

ELISA adalah sejenis penanda patologi autoimun dan neoplasma malignan.

Penyediaan untuk analisis

Sebagai persediaan untuk kajian ini perlu mematuhi peraturan ini:

  • hari sebelum pensampelan darah tidak boleh merokok dan minum alkohol,
  • tidak bermain sukan atau aktiviti fizikal lain,
  • cuba untuk mengelakkan tekanan

Sebelum anda lulus analisis ELISA, anda perlu mengelakkan tekanan.

  • berhenti menggunakan ubat tidak lewat daripada 10 hari sebelum manipulasi.

    • Doktor juga mengesyorkan mematuhi diet khas - untuk tidak mengecualikan makanan berlemak dan goreng, dan jika kajian itu dijalankan ke atas hepatitis, maka tidak perlu menggunakan sayur-sayuran oren, dan terutama buah sitrus. Menderma darah harus di pagi hari dengan perut kosong.

    Analisis positif palsu adalah disebabkan oleh cadangan yang tidak dipenuhi, terutamanya penggunaan makanan berlemak, yang membawa kepada kepekatan trigliserida yang berlebihan dalam plasma, oleh kerana kekonduksian ELISA berkurangan.

    Perintah persampelan

    Sebagai bahan ujian boleh digunakan darah keseluruhan, serum atau plasma darah vena. Bahan itu dikumpulkan, biasanya dari vena cubital, jarum sekali pakai dan tiub vakum digunakan untuk ini, diperlukan 5-10 ml darah.

    Untuk ketepatan keputusan, adalah penting untuk mematuhi teknik pensampelan yang betul - pembalakan kapal itu sendiri dan tisu di sekelilingnya hendaklah dibuat oleh satu manipulasi, oleh itu jarum pendek dengan diameter besar digunakan, supaya dinding urat yang bertentangan tidak cedera dan sel darah merah tidak rosak.

    Selain itu, untuk mengekalkan integriti sel darah merah, darah perlu mengalir ke bawah dinding tiub.

    Semasa penyimpanan bahan itu, pengionan yang mungkin boleh dielakkan, di samping itu, bahan itu tidak boleh bersentuhan dengan sisa-sisa kuman, oleh itu hanya tiub plastik sekali pakai yang digunakan, dengan nama penuh pesakit, tarikh dan masa penyerahan bahan.

    Sekiranya bahan penyimpanan yang pendek diperlukan, maka ruang penyejuk dengan suhu 2-4 o C digunakan, jika perlu penyimpanan lebih lama, maka bahan dibekukan pada suhu -20oC.

    Bagaimana analisisnya

    Selepas penyediaan bahan di bawah kajian, doktor makmal meneruskan dengan manipulasi yang diperlukan. Untuk tujuan ini, beberapa set antigen khas digunakan, disiram dengan harta untuk mencetuskan tindak balas badan terhadap rangsangan, ini adalah pelbagai jangkitan, hormon, alergen.

    Skim reaksi yang diharapkan "antigen-antibodi" kelihatan seperti ini:

    • Tindak balas utama adalah Ig (Ab) dan antigen patogen yang disucikan (Ag).
    • Untuk mengesan kompleks imun yang dihasilkan, tindak balas imunologi yang baru kemudiannya, di mana Ig tertentu yang berkaitan bertindak sebagai antigen dan conjugate-Ig (Ab) bertindak sebagai antibodi untuknya.
    • Tahap terakhir adalah tindak balas enzimatik, bersama-sama dengan molekul conjugate pemangkin. Substrat adalah kromogen (tidak berwarna), yang berwarna semasa tindak balas, dan intensitas warna ditentukan oleh penunjuk kuantitatif imunoglobulin dalam sampel.

    Pada masa ini, mengembangkan pelbagai pilihan ELISA yang berbeza, klasifikasi yang jelas dari mereka hilang. Biasanya, kaedah ini dipertimbangkan berdasarkan pemisahannya menjadi heterogen dan homogen - semua fasa analisis berlaku menggunakan fasa pepejal atau hanya menggunakan penyelesaiannya.

    Makmal diagnostik klinikal moden biasanya menggunakan ELISA heterogen (fasa pepejal), di mana fasa pepejal bermakna penyerapan antigen atau antibodi pada permukaan pepejal telaga khas yang terletak di atas platter polistirena, kaedah tersebut dibahagikan kepada ELISA langsung dan tidak langsung.

    Dengan ELISA langsung, pembetulan antigen yang diperkenalkan semasa proses inkubasi pada permukaan telaga kosong, untuk sampel ini, sampel yang akan diuji diletakkan dalam telaga yang bersih selama 20-25 minit, ini perlu melampirkan antigen ke permukaannya. Selepas ini, antibodi yang diperlukan ditambah. Selanjutnya, bahan itu kekal untuk masa tertentu untuk pembentukan ikatan.

    Antibodi sentiasa ditambah secara berlebihan, jadi walaupun mereka hadir, tiada antigen yang tidak berkaitan dalam sampel, dan jika tidak ada antigen sama sekali, maka tidak akan ada pautan. Untuk menghilangkan antibodi "tambahan", pembuangan dilakukan, selepas itu hanya antibodi yang telah mewujudkan sambungan dengan antigen.

    Ini diikuti dengan tindak balas enzimatik - penambahan larutan dengan enzim ke telaga, selepas itu bon yang diperoleh adalah berwarna.

    Dalam ELISA tidak langsung, antibodi yang digunakan adalah pra-berkaitan dengan substrat reaksi enzimatik; dalam kes ini, persatuan antibodi dengan antigen berlaku semasa proses inkubasi, selepas itu pengerasan bon di permukaan telaga berlaku, dan reagen conjugate dan substrat-chromogenik yang diperkenalkan selepas konjugasi mengotorkan reaksi.

    Oleh itu, perbezaan utama antara kaedah tidak langsung dan langsung tidak melekatkan bahan ke permukaan telaga bersih, tetapi mengikat antigen yang tidak digilap pada plat.

    Reaksi berhenti dengan penggunaan peranti khusus, maka setiap orang menjalani proses pengukuran fotometrik, diikuti dengan ciri perbandingan hasil yang diperoleh dengan sampel kawalan yang telah dijalankan sebelumnya.

    Sekiranya peningkatan ketumpatan optik dikesan dalam sampel, maka kepekatan antibodi spesifik dalam keputusan ujian adalah overestimated.

    Bila analisis akan siap

    Kajian ini tidak mengambil banyak masa, dan mengambil masa 1 hingga 10 hari dari mengambil darah ke hasilnya, bergantung kepada langkah diagnostik.

    Keputusan ujian dan tafsiran mereka

    Dalam bentuk yang diterima oleh pesakit, hasil diagnosis menunjukkan hasil negatif atau positif bagi kelas imunoglobulin tertentu, serta penunjuk kuantitatif pelbagai kelas antibodi.

    Terdapat pelbagai tafsiran hasilnya:

    1. IgM (+) (IgA, IgG tidak ditentukan) - proses penyembuhan;
    2. IgM (-); IgG (+), IgA (+) - patologi berjangkit kronik;
    3. IgM, IgG, IgA (semua dengan - nilai) - kekurangan mekanisme perlindungan terhadap jangkitan;
    4. IgG (+/-) dan IgA (+/-), IgM (+) adalah proses akut;
    5. IgM (-), IgA (-), IgG (+) - imuniti pasca berjangkit;
    6. IgM, IgG, IgA (+) - patologi kronik di peringkat akut.

    Sebagai contoh, jika IgG dan IgM dikesan, maka mungkin salah satu daripada penyakit ini dalam pesakit:

    • hepatitis virus;
    • cytomegalovirus;
    • herpes;
    • cacar air;
    • klamidia;
    • jangkitan staphylococcal atau streptococcal.

    Immunoassay sering ditetapkan untuk kajian hormon, piawaian ditunjukkan dalam jadual:

    Artikel Tambahan Mengenai Embolisme